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2013-11
PCR技術(shù)專(zhuān)題：PCR法檢測(cè)乙肝病毒（HBV）
PCR方法操作簡(jiǎn)便，靈敏度高，可檢測(cè)出少至0.1pg的目的DNA。目前已廣泛應(yīng)用于多種病原微生物的檢測(cè)。乙肝病毒（HBV）感染引起的乙型肝炎，在我國(guó)發(fā)病率很高，而且HBV與肝硬化、原發(fā)性肝癌關(guān)系密切，...
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2013-11
PCR技術(shù)專(zhuān)題：分子標(biāo)記——AFLP原理和操作步驟
一、原理AFLP也是通過(guò)限制性?xún)?nèi)切酶片段的不同長(zhǎng)度檢測(cè)DNA多態(tài)性的一種DNA分子標(biāo)記技術(shù)。但AFLP是通過(guò)PCR反應(yīng)先把酶切片段擴(kuò)增，然后把擴(kuò)增的酶切片段在高分辨率的順序分析膠上進(jìn)行電泳，多態(tài)性即以...
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2013-11
PCR技術(shù)專(zhuān)題：PCR-SSCP 技術(shù)實(shí)驗(yàn)
實(shí)驗(yàn)原理聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-單鏈構(gòu)象多態(tài)（PolymeraseChainReaction-SingleStrandConformationPolymorphism，PCR-SSCP）技術(shù)是在PCR技術(shù)基礎(chǔ)...
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2013-11
PCR技術(shù)專(zhuān)題：直接原位PCR（In situ PCR）
原位PCR是原位雜交細(xì)胞定位和PCR的高靈敏度相結(jié)合的技術(shù)，使得靶基因檢測(cè)有了極大的改進(jìn)。此技術(shù)是在細(xì)胞（爬片、甩片或涂片）或組織（石蠟、冰凍切片）上直接對(duì)靶基因片段進(jìn)行擴(kuò)增，通過(guò)摻入標(biāo)記基團(tuán)直接顯色...
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2013-11
PCR技術(shù)專(zhuān)題：實(shí)時(shí)熒光定量PCR具體實(shí)驗(yàn)步驟
1樣品RNA的抽提①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。②兩相分離每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的氯仿，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。...
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2013-11
PCR技術(shù)專(zhuān)題：聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）擴(kuò)增和擴(kuò)增產(chǎn)物克隆
PCR（PolymeraseChainReaction，聚合酶鏈反應(yīng)）是一種選擇性體外擴(kuò)增DNA或RNA的方法.它包括三個(gè)基本步驟：（1）變性（Denature）：目的雙鏈DNA段在94℃下解鏈；（2...
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2013-11
PCR技術(shù)專(zhuān)題：逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)實(shí)驗(yàn)方法
逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（ReverseTranscription-PolymeraseChainReaction，RT-PCR）的原理是：提取組織或細(xì)胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，采用Oli...