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2013-11
PCR技術專題：PCR技術原理、實驗步驟和應用
一、實驗目的1.掌握聚合酶鏈式反應的原理。2.掌握移液槍和PCR儀的基本操作技術。二、實驗原理PCR技術，即聚合酶鏈反應（polymerasechainreaction，PCR）是由美國PECetus...
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2013-11
轉染專題：脂質體轉染的幾個實驗方法
摘要：本實驗介紹了脂質體轉染的幾個方法。實驗原理脂質體（LR）試劑是陽離子脂質體DOTMA和DOPE的混合物（1：1）。它適用于把DNA轉染入懸浮或貼壁培養(yǎng)細胞中，是目前條件下zui方面的轉染方法之一...
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2013-11
感受態(tài)專題：感受態(tài)細胞的制備及溶液配制
實驗試劑LB培養(yǎng)基，KB培養(yǎng)基，10%甘油，液氮，0.1MCaC12溶液實驗設備超凈工作臺，搖床，離心機，250mL離心瓶，0.5mL的離心管實驗材料大腸桿菌，農(nóng)桿菌和假單胞桿菌實驗步驟1.電擊感受態(tài)...
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2013-11
感受態(tài)專題：真核細胞的轉染實驗步驟
1.在6孔板中接種1~3×105細胞/孔，加入2ml*培養(yǎng)基，置CO2孵箱中37℃培養(yǎng)過。2.待細胞長到50-80%單層時，在無菌離心管中配制如下溶液：i.溶液A：將4?g待轉染的超純DNA稀釋到25...
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2013-11
感受態(tài)專題：轉化克隆的篩選和鑒定
1．目的學會用酶切法或PCR法篩選重組質粒轉化成功的克隆菌。2．原理利用轉化后宿主菌所獲得的抗菌素抗性性狀篩選出獲得質粒的菌落克隆。再從這些菌落中鑒定出質粒上帶有外源基因插入片斷的克隆菌落。3．器材旋...
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2013-11
感受態(tài)專題：細胞瞬時轉染
原理：通過脂質體介導轉染法及電穿孔等基因轉染技術，將靶基因導入細胞，一般在轉染后48小時左右，靶基因即可在細胞內(nèi)表達。根據(jù)不同的實驗目的，48小時后即可進行靶基因表達的檢測等實驗。應用：觀察目的基因及...
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2013-11
感受態(tài)專題：電轉化流程
一、電轉化感受態(tài)細胞的制備1.用槍頭挑取單克隆菌落，投入盛有10mlLB液體培養(yǎng)基的50ml離心管中。（同時做培養(yǎng)基和槍頭的空白對照）2.37℃，220rpm，培養(yǎng)14-16個小時。3.第二天，以1：...