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PCR技術專題：PCR法檢測乙肝病毒（HBV）
更新時間：2013-11-20 瀏覽次數(shù)：1071
PCR方法操作簡便，靈敏度高，可檢測出少至0.1pg的目的DNA。目前已廣泛應用于多種病原微生物的檢測。
乙肝病毒（HBV）感染引起的乙型肝炎，在我國發(fā)病率很高，而且HBV與肝硬化、原發(fā)性肝癌關系密切，因此，HBV的診斷極為重要。PCR檢測HBV-DNA敏感性明顯高于傳統(tǒng)的血清學方法，且能顯示HBV在體內(nèi)復制情況，直接反映患者血液的感染性，并對模棱兩可的或與臨床表現(xiàn)不符的血清學結果，PCR技術有助于明確診斷。
【材料】
待檢血清、HBV-PCR反應液 20管（20μl/ 管）、HBV-DNA裂解液、陽性模板、溴化乙錠、PCR擴增儀、電泳儀、紫外線分析儀。
【方法】
1、標本處理：
取混勻的血清20μl加20μl裂解液，攪勻后100℃沸水浴10分鐘，zui后15000rpm/分鐘離心3分鐘，取4μl上清待檢。
2、加樣及PCR：
取反應液一管（使用前稍加離心），加4μl待檢上清或陽性對照于底層反應液中，混勻后高速離心片刻，然后置94℃預變性2分鐘，再按94℃/30秒、55℃/30秒、72℃/60秒擴增35個循環(huán)。
3、電泳與結果判斷：
取15μl 反應液，經(jīng)2%瓊脂糖凝膠電泳（5V/cm）30分鐘后，在紫外燈下觀察結果，若410bp處出現(xiàn)橙黃色帶，則HBV為陽性。
【注意事項】
1、反應管中加好所有試劑后，應立即上機擴增，以免形成過多的二聚體。